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低温生物菌种怎么保藏

菌种保藏(culture preservation，culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术。或经人工选育得到的变异型纯种，使其存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌种原有的各种特征和生理活性。基本原理是使微生物的生命活动处于休眠状态，也就是使微生物的-作用-在低范围内。干燥、低温和隔绝空气是-获得这种状态的主要措施。有针对性地创造干燥、低温和隔绝空气的外界条件，就是微生物菌种保藏的基本技术。常用的方法有冻干保藏法、深低温保藏法、液氮保藏法、矿油封藏法、固体曲保藏法、砂土管保藏法、琼脂穿刺保藏法等。日常工作中，常选用4℃冰箱进行短时间的菌种保藏

菌种保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法大致可分为以下几种：

1．传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等后者作保藏厌氧-用，培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种存活率，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如-、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。-等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法

可分低温冰箱-20—-30℃，-50—-80℃、干冰酒精快速-约-70℃和液氮-196℃等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度-70℃左右下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分真空干燥。

低温生物菌种的筛选分离

筛选：工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用菌种。

分离：首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品，用无菌水稀释后，涂布于置有适宜-、霉菌生长的琼脂培养基平皿上，并将其倒置于恒温箱中，培养一定时间，平皿上长出的许多单个菌落单一微生物的集落经分别分离后即为各种纯种菌株，简称纯种，移种至试管斜面培养基上，置4℃冰箱备用。

筛选模型：根据不同的筛选目的，采用不同的筛选模型。如常规筛选菌种的方法是将土壤中分离所得的纯种，在含有琼脂培养基的平皿上培养后，用打孔器将菌块移至含有试验菌的琼脂培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后取出，如在菌块的周围有透明的-圈，则表明此菌种具有产生抑制试验菌生长的菌种物质的能力。所得菌种经过摇瓶液体发酵，测定发酵液或菌丝体内菌种的含量，选出生产能力高的菌种。另一方面对所提取的菌种进行结构分析、药理试验及-试验等，确为有效者，即可作为生产菌种。又如筛选脂肪酶生产菌种的方法是将分离所得的霉菌涂布于含有牛脂的琼脂培养基上，恒温培养一定时间，如菌落周围出现透明圈的，则该菌具有分解脂肪的能力，进一步作摇瓶发酵测定酶活力，挑选产量高者作生产菌种的出发菌株。

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